小鼠神經元原代培養細胞實驗

一、背景(jing)

神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)元(yuan)原代(dai)培(pei)(pei)養(yang)是將胚胎哺(bu)乳動(dong)物(wu)中樞神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)系統的(de)部分組織(zhi)，如大腦(nao)皮層、海馬、脊髓等腦(nao)組織(zhi)直接取出，再接種培(pei)(pei)養(yang)的(de)方(fang)法。目前國(guo)內、外有(you)關神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)元(yuan)培(pei)(pei)養(yang)的(de)方(fang)法較多，但在原代(dai)培(pei)(pei)養(yang)中神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)元(yuan)的(de)純度(du)和產量(liang)方(fang)面還存(cun)在一些急待解決的(de)問(wen)題。由于神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)元(yuan)是一種高(gao)度(du)分化的(de)細胞，相對于其(qi)它細胞而言，神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)元(yuan)在體(ti)外更難以(yi)存(cun)活和生長。因此，體(ti)外培(pei)(pei)養(yang)神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)元(yuan)要求的(de)培(pei)(pei)養(yang)方(fang)法和營養(yang)條件(jian)均較為特殊。

神(shen)(shen)經(jing)細胞的體外培(pei)養(yang)技術是研究神(shen)(shen)經(jing)源(yuan)性(xing)疾(ji)病的發病機(ji)制(zhi)、進程的一個重要工具，能很好(hao)的、直觀的反映離(li)體神(shen)(shen)經(jing)元(yuan)的發育狀(zhuang)況和生理活(huo)性(xing)，如何建立一個穩定成熟的神經細胞培養體系是神經系統疾病體外實驗研究順利進行的基礎。隨著基礎醫學及臨床醫學研究的逐漸深入，神經細胞的體外培養技術在腦損傷、神經障礙性疾病、衰老相關神經疾病方面得到廣泛重視和普及應用。

二、小鼠神經元原代培養細胞實驗步驟

(1)75% (體積分數)酒精消毒(du)孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切(qie)取脊髓,置于冷(leng)的(de)無鈣、鎂的(de)HBSS液(ye)的(de)平皿中(zhong)( 下置冰袋)。

(2)解剖顯微鏡(jing)無菌條(tiao)件下仔細剝離脊膜(mo)及血管。

(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小(xiao)，消化(hua)液37℃消化(hua)15-20min，每五分鐘振(zhen)蕩一(yi)次；

(4)去(qu)掉上清(qing)，加(jia)入終止(zhi)液終止(zhi)消化，吹打10-15次(ci)，不能有氣泡，收集(ji)上清(qing)，剩余組織再消化一次(ci)。

(5)4℃1000rpm離心(xin)10min，棄上清(qing)，加入種植液1重(zhong)懸，培養箱內差速(su)貼壁30min；

(6)收集(ji)上清，臺(tai)盼藍染色計(ji)數(shu)，按6*105cells/孔(kong)(kong)種(zhong)入六孔(kong)(kong)板（種(zhong)植液1），37℃，5%CO2，95%飽和濕度(du)的培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

(7)培養第二天，全(quan)換液更換為(wei)種植液2；

(8)培養第四天，半量換液(ye)加入5uM的阿糖胞苷，24h全量換液(ye)；

(9)之后每周(zhou)換液兩次。