一、背景

　　神經元原代培養是(shi)將胚胎(tai)哺乳動物中樞神經(jing)系統的部分組織(zhi)，如大腦(nao)皮層、海馬、脊髓等腦(nao)組織(zhi)直接取(qu)出，再接種(zhong)培(pei)(pei)養(yang)的方(fang)法。目前國內(nei)、外(wai)有關神經(jing)元(yuan)培(pei)(pei)養(yang)的方(fang)法較多(duo)，但在(zai)(zai)原(yuan)代培(pei)(pei)養(yang)中神經(jing)元(yuan)的純度和產量方(fang)面還存在(zai)(zai)一(yi)些(xie)急待解決的問題。由于(yu)神經(jing)元(yuan)是(shi)一(yi)種(zhong)高度分化(hua)的細(xi)胞，相對于(yu)其(qi)它細(xi)胞而言，神經(jing)元(yuan)在(zai)(zai)體(ti)外(wai)更(geng)難以存活和生長。因此，體(ti)外(wai)培(pei)(pei)養(yang)神經(jing)元(yuan)要求的培(pei)(pei)養(yang)方(fang)法和營養(yang)條件均(jun)較為特殊。

　　神(shen)經(jing)細胞(bao)的(de)(de)(de)(de)體(ti)外培(pei)養技術是研究神(shen)經(jing)源性疾(ji)病的(de)(de)(de)(de)發(fa)病機制、進程的(de)(de)(de)(de)一(yi)個(ge)重要工(gong)具，能(neng)很好(hao)的(de)(de)(de)(de)、直觀的(de)(de)(de)(de)反映離體(ti)神(shen)經(jing)元的(de)(de)(de)(de)發(fa)育狀況和生理活性，如何建立一(yi)個(ge)穩定成熟的(de)(de)(de)(de)神(shen)經(jing)細胞(bao)培(pei)養體(ti)系是神(shen)經(jing)系統(tong)疾(ji)病體(ti)外實驗(yan)研究順(shun)利進行的(de)(de)(de)(de)基礎。隨著基礎醫學(xue)及(ji)臨床醫學(xue)研究的(de)(de)(de)(de)逐(zhu)漸深入，神(shen)經(jing)細胞(bao)的(de)(de)(de)(de)體(ti)外培(pei)養技術在腦損傷、神(shen)經(jing)障礙性疾(ji)病、衰(shuai)老(lao)相(xiang)關神(shen)經(jing)疾(ji)病方面得(de)到廣泛重視和普及(ji)應用。

　　二、神經元原代培養細胞實驗步驟

　　(1)75%(體積分數)酒精消(xiao)毒孕鼠,在無菌條(tiao)件(jian)下(xia)(xia)取出胎(tai)鼠,分離并切(qie)取脊(ji)髓,置于冷的(de)(de)無鈣、鎂的(de)(de)HBSS液的(de)(de)平(ping)皿中(下(xia)(xia)置冰袋)。

　　(2)解(jie)剖顯微(wei)鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血(xue)管。

　　(3)用彈簧剪(jian)將脊髓剪(jian)成1cm3大小，消(xiao)化液(ye)37℃消(xiao)化15-20min，每五分鐘振蕩一次；

　　(4)去掉(diao)上(shang)清(qing)，加入終(zhong)止液終(zhong)止消化(hua)，吹打10-15次，不能有(you)氣泡，收集上(shang)清(qing)，剩余組織(zhi)再消化(hua)一(yi)次。

　　(5)4℃1000rpm離心10min，棄上清，加入種植液1重懸，培養(yang)箱內差速貼壁(bi)30min；

　　(6)收集上清，臺盼(pan)藍(lan)染色計(ji)數，按6*105cells/孔種入六孔板（種植液1），37℃，5%CO2，95%飽和濕(shi)度的培(pei)養箱中培(pei)養；

　　(7)培養第二天，全換(huan)液更換(huan)為種植(zhi)液2；

　　(8)培(pei)養第(di)四(si)天，半量換液(ye)加入(ru)5uM的阿糖胞苷，24h全量換液(ye)；

　　(9)之后每周換液兩(liang)次。