大鼠神經元原代培養細胞實驗

一、背景

神經元原代培(pei)養(yang)(yang)是將胚(pei)胎哺乳動物中(zhong)樞神經系(xi)統的(de)部分(fen)組織(zhi)，如(ru)大腦皮層、海馬、脊髓等腦組織(zhi)直接取出，再接種(zhong)培(pei)養(yang)(yang)的(de)方(fang)(fang)法。目(mu)前國內、外(wai)(wai)有關(guan)神經元培(pei)養(yang)(yang)的(de)方(fang)(fang)法較(jiao)多，但在(zai)(zai)原代培(pei)養(yang)(yang)中(zhong)神經元的(de)純度和(he)產量方(fang)(fang)面還存在(zai)(zai)一些急待(dai)解決的(de)問題。由于神經元是一種(zhong)高度分(fen)化(hua)的(de)細胞，相對于其它細胞而言，神經元在(zai)(zai)體(ti)外(wai)(wai)更難以(yi)存活和(he)生長。因此，體(ti)外(wai)(wai)培(pei)養(yang)(yang)神經元要(yao)求(qiu)的(de)培(pei)養(yang)(yang)方(fang)(fang)法和(he)營養(yang)(yang)條件均較(jiao)為(wei)特殊。

神(shen)(shen)經(jing)(jing)細胞的(de)(de)體(ti)外培養技術是研究神(shen)(shen)經(jing)(jing)源性(xing)疾病的(de)(de)發病機制、進程(cheng)的(de)(de)一(yi)個重(zhong)要工具，能很好(hao)的(de)(de)、直觀的(de)(de)反映離體(ti)神(shen)(shen)經(jing)(jing)元的(de)(de)發育狀(zhuang)況和生理(li)活性(xing)，如何建立一個穩定成熟的神經細胞培養體系是神經系統疾病體外實驗研究順利進行的基礎。隨著基礎醫學及臨床醫學研究的逐漸深入，神經細胞的體外培養技術在腦損傷、神經障礙性疾病、衰老相關神經疾病方面得到廣泛重視和普及應用。

二、大鼠神經元原代培養細胞實驗步驟

(1)75% (體積分(fen)數)酒精消(xiao)毒(du)孕(yun)鼠,在無菌條件(jian)下取出胎鼠,分(fen)離并切取脊(ji)髓,置(zhi)于冷的(de)無鈣、鎂的(de)HBSS液的(de)平皿中( 下置(zhi)冰袋(dai))。

(2)解剖顯微鏡(jing)無菌條件下仔細剝離(li)脊膜及血管。

(3)用彈(dan)簧(huang)剪(jian)將脊髓剪(jian)成1cm3大小，消化液(ye)37℃消化15-20min，每五(wu)分鐘(zhong)振蕩一次；

(4)去掉上(shang)清(qing)，加入終止液終止消(xiao)化，吹打10-15次(ci)，不能有氣(qi)泡，收(shou)集上(shang)清(qing)，剩余(yu)組織再消(xiao)化一次(ci)。

(5)4℃1000rpm離心(xin)10min，棄上清，加入種植液(ye)1重懸(xuan)，培養箱內(nei)差速貼壁30min；

(6)收集上(shang)清，臺盼(pan)藍(lan)染色計(ji)數(shu)，按(an)6*105cells/孔種入六孔板（種植(zhi)液1），37℃，5%CO2，95%飽(bao)和濕(shi)度的培養箱中培養；

(7)培養(yang)第二天，全換液更換為(wei)種植液2；

(8)培(pei)養第四天，半量換液加入5uM的阿糖胞(bao)苷，24h全量換液；

(9)之后每(mei)周換液兩次。