一、服務(wu)介紹

　　大量的(de)研究(jiu)表明線粒(li)體與細(xi)胞凋(diao)亡(wang)(wang)(wang)密切相關(guan)，其中(zhong)線粒(li)體跨(kua)膜電(dian)位（MMP）的(de)下(xia)降，被(bei)認為是細(xi)胞凋(diao)亡(wang)(wang)(wang)級聯反應過程中(zhong)早(zao)發(fa)生的(de)事件(jian)之(zhi)一。它發(fa)生在細(xi)胞核凋(diao)亡(wang)(wang)(wang)特征（染色質(zhi)濃縮(suo)、DNA斷裂）出現之(zhi)前,一旦(dan)線粒(li)體跨(kua)膜電(dian)位崩(beng)潰，則細(xi)胞凋(diao)亡(wang)(wang)(wang)不可逆(ni)轉。

　　二、實驗原理

　　JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發射峰。當JC-1濃度低或膜電位水平低時，主要以單體形式存在，激發波長為527nm，呈綠色熒光；當JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時，形成聚合物，發出紅色的熒光，激發波長為590nm。當細胞發生凋亡時，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內釋放，紅光強度減弱，以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。

　　三、實驗流程

　　1.細胞培養；

　　2.用適當(dang)的方法誘導細(xi)胞(bao)凋亡，同時設立(li)陰性依照組合陽(yang)性對(dui)照組，收集細(xi)胞(bao)；

　　3.用PBS洗滌細胞三次，收集不(bu)多于1×106的細胞；

　　4.取100μL10×IncubationBuffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×IncubationBuffer，混勻(yun)并預熱至37℃；

　　5.吸取(qu)500μL1×IncubationBuffer，加入1μLJC-1，渦旋混勻配(pei)成JC-1工作液；

　　6.取500μLJC-1工作液(ye)將細(xi)胞均勻懸浮，37℃，5%CO2的培養箱中孵(fu)育15~20min。

　　7.室(shi)溫離心(xin)（2000rpm,5min）收集(ji)細胞，用1×IncubationBuffer洗兩次(ci)；

　　8.吸取500μL10×IncubationBuffer重新懸(xuan)浮細胞；

　　9.流(liu)式細胞儀檢(jian)測(ce)，分析。

　　四、客戶提供

　　細胞(bao)(bao)株(zhu)(凍(dong)存(cun)株(zhu)或培養好的細胞(bao)(bao))，相關藥品或MMP檢測(ce)試劑盒（可代購）!

　　五、公司提供

　　實驗步驟、結(jie)果圖(tu)、數據結(jie)果和分析(xi)報告

　　實驗周期：1-2周，具體需(xu)要(yao)根據細胞生長情況及實驗內容而定。