軟瓊脂克隆形成服務實驗步驟

1.獲取(qu)樣本，培養細胞(bao)，

2.調(diao)整細胞(bao)懸液(ye)密度為1x103個/ml細胞(bao)。

3.制備底層瓊脂，溶(rong)化的5%瓊脂和 37℃ 左右預溫的新鮮培(pei)養液(ye)以1:9比例(li)在 40℃ 均勻(yun)混合，加(jia)入培(pei)養皿(min)(直

徑 60mm)中，每(mei)皿含0.5%瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)培養基2ml，室溫下瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)凝固。

4.制備上層瓊脂(zhi) 37℃ 密度每川(chuan)含(han)200個的細胞懸液1.5ml移入(ru)小燒杯中(zhong)，加(jia)入(ru) 40℃、5%瓊脂(zhi)等(deng)體(ti)積混勻，即成0.25%半(ban)固體(ti)瓊脂(zhi)培養(yang)基。配好的半(ban)固體(ti)瓊脂(zhi)培養(yang)其立即加(jia)入(ru)鋪有(you)底層瓊脂(zhi)的培養(yang)用中(zhong)，率溫下瓊脂(zhi)凝固。37℃，5%CO2靜罟培養(yang)2-3周。

5.當培養血中(zhong)出現肉眼可見克(ke)降(jiang)時，終止(zhi)培養，棄去(qu)培養液(ye)(ye)，PBS液(ye)(ye)小心(xin)浸洗(xi)2次，空(kong)(kong)氣干(gan)燥(zao)，甲醇(chun)固定15分鐘，棄甲醇(chun)空(kong)(kong)氣干(gan)燥(zao)，用Giemsa染液(ye)(ye)染色10分鐘，流水緩(huan)慍洗(xi)去(qu)邊液(ye)(ye)，空(kong)(kong)氣干(gan)燥(zao)。

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