實驗過程

(1)標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)的(de)稀釋與加(jia)樣:標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)按(an)照說明書(shu)稀釋好五個梯(ti)度，各個梯(ti)度每孔(kong)加(jia)樣量都為50uL ;

(2)加樣:分(fen)別設(she)空白孔(kong)、待測樣品(pin)(pin)孔(kong)。在酶(mei)標包被板(ban)上待測樣品(pin)(pin)孔(kong)中先加樣品(pin)(pin)稀釋液40uL，然后再加待測樣品(pin)(pin)10uL。加樣將樣品(pin)(pin)加于酶(mei)標板(ban)孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)混勻;

(3)溫育:用封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)后(hou)置37℃溫育30min;

(4)配(pei)液(ye)(ye)洗滌:將(jiang)30(48T的20倍(bei)(bei))倍(bei)(bei)濃縮洗滌液(ye)(ye)用(yong)蒸餾水30(48T的20倍(bei)(bei))倍(bei)(bei)稀(xi)釋后(hou)備用(yong);小心(xin)揭(jie)掉封板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)(ye)體(ti)，甩干(gan)，每(mei)孔(kong)加滿洗滌液(ye)(ye)，靜(jing)置30sec后(hou)棄(qi)去(qu)，如此(ci)重復5次，拍干(gan);

(5)加(jia)酶:每孔加(jia)入酶標試劑50uL，空(kong)白孔除外;

(6)溫(wen)育:用封(feng)板膜封(feng)板后置(zhi)37℃溫(wen)育30min ;

(7)洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩(shuai)干，每(mei)孔(kong)加滿洗滌液，靜(jing)置30sec后(hou)棄去，如此重復5次(ci)，拍(pai)干;

(8)顯色(se):每孔先加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)A50uL，再加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)B50uL，輕輕震蕩混(hun)勻(yun)，37℃避光顯色(se)15min;

(9)終止:每(mei)孔加終止液50uL，終止反應;

(10)測定:以(yi)空白空調零，450nm波長依序測量各(ge)孔的吸光度(du)(OD值)。測定應(ying)在加終止液后15min以(yi)內進行。

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